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近期,兴证医药身体健康公布了一篇关于三代基因测序行业讲解的报告,动脉网指出这份报告有助医疗从业者对三代测序技术和市场前景有一个全方位的理解,因而展开了刊登和整理。 在二代测序(NGS)仍未步入投资热潮的情况下,技术突破捷报接连的三代测序(3GS)又转入到了投资人的视野中。1986年,第一台商用基因测序设备月经常出现,到第二代测序设备经常出现,期间间隔了19年时间。
而第二代设备问世,到第三代设备的问世,意味着用了5年,基因测序设备的更新换代速度正在大大减缓。这就只不过2G手机跳过3G,必要横跨到了4G时代。
报告通过四个方面对第三代基因测试技术展开分析: 1.第三代基因测试技术的发展现状 以Helicos公司的Heliscope单分子测序仪、PacificBiosciences公司的SMRT技术和OxfordNanoporeTechnologies公司的纳米孔单分子技术为代表的三代测序技术在经过了多年发展后,早已逐步渐趋成熟期。 尽管当下该技术还有成本偏高、错误率较高、生物信息学分析软件过于非常丰富的问题,但其在读宽、测序速度等方面都具备显著优势。 三代测序设备已构建稳定性、小型化,未来随着准确度提高、平行测序能力和酶活性等问题的解决问题,第三代测序技术将沦为未来发展的最重要技术趋势,构建大规模商业化将是大势所趋。
2.第三代基因测序方法原理 Helicos公司的Heliscope单分子测序仪、PacificBiosciences公司的SMRT技术和OxfordNanoporeTechnologies公司的纳米孔单分子技术,被指出是第三代测序技术。 与前两代技术比起,他们仅次于的特点是单分子测序,其中,Heliscope技术和SMRT技术利用荧光信号展开测序,而纳米孔单分子测序技术利用有所不同碱基产生的电信号展开测序。
PacBioSMRT技术应用于了边制备边测序的思想,并以SMRT芯片为测序载体,芯片上有很多小孔,每个孔中皆有DNA聚合酶。 测序基本原理是:DNA聚合酶和模板融合,4色荧光标记4种碱基(即是dNTP),在碱基配对阶段,有所不同碱基的重新加入,不会收到有所不同光,根据光的波长与峰值可辨别转入的碱基类型。
DNA聚合酶是构建超长读长的关键之一,读长主要跟酶的活性维持有关,它主要不受激光对其导致的受损所影响。 另外,可以通过检测邻接两个碱基之间的测序时间,来检测一些碱基标记情况,既如果碱基不存在标记,则通过聚合酶时的速度不会减缓,邻接两峰之间的距离减小,可以通过这个来之间检测甲基化等信息。SMRT技术的测序速度迅速,每秒大约数个dNTP。
但是,同时其测序错误率较为低(这完全是目前单分子测序技术的通病),超过15%。但好在它的错误是随机的,并会像第二代测序技术那样不存在测序错误的偏向,因而可以通过多次测序来展开有效地的数据流(代价是反复测序,也就是成本不会减少)。
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